Un ratón Knockin define un modelo animal en el que una secuencia de genes de interés se altera por sustitución uno por uno con un transgeno, o mediante la adición de secuencias de genes que no se encuentran dentro del locus.
La inserción de un transgén se realiza típicamente en loci específicos. Este enfoque «dirigido» causa menos alteraciones del entorno genético activo por transcripción.
Los ratones Knockin son adecuados para una amplia gama de aplicaciones, desde el estudio de elementos reguladores, como promotores, hasta la producción de anticuerpos humanizados terapéuticamente útiles.
Nuestras soluciones modelo de ratón Knockin
Además de los Knockins convencionales donde se agrega una secuencia génica de interés a un locus endógeno, ofrecemos un conjunto de soluciones de uso común:
- Quick Knockin™ (Rosa26 y Hprt)
Control total de la expresión génica dirigiéndose a los loci permisivos Rosa26 y Hprt mejor estudiados.
- Mutación puntual del ratón Knockin
Afecta la función de una proteína dada (ganancia o pérdida de función) por uno o más nucleótidos mutados
- Ratón reportero
Monitorea eventos genéticos, función de proteínas, localización y tráfico celular
- Modelos humanizados de ratón
Sustituyen una secuencia de genes de ratón por la contraparte humana
Activación condicional de inserciones o sustituciones de genes
Todos los diseños de Knockin pueden soportar condiciones que permiten activar la inserción o sustitución de genes: A) en tipos celulares específicos en un determinado tejido, mientras que otros tipos celulares y tejidos exhiben una expresión génica funcional sin modificar, y/o B) temporalmente en un punto de tiempo dado en animales embrionarios, postnatales o adultos.
Normalmente se utilizan dos enfoques comunes:
lox-STOP-lox
La recombinasa Cre reconoce los loci de recombinación loxP que causa una eliminación de la secuencia de PARADA entre los dos sitios de loxP, lo que permite la transcripción de su gen de mutación de interés.
FLEx
Tanto loxP como lox511 son reconocidos por la recombinasa Cre, pero los sitios de lox511 solo pueden recombinarse con otros sitios de lox511, no con sitios de loxP.
Cuando la secuencia de ADN está flanqueada por sitios lox en orientaciones opuestas, el Cre invertirá la secuencia entre los sitios. Si la secuencia de ADN está flanqueada por sitios lox en la misma orientación, el Cre eliminará la secuencia.
Al combinar el tipo de sitios de lox, el número y la orientación de los sitios de lox que rodean sus genes de interés, se puede crear una poderosa herramienta flexible para sus necesidades científicas específicas.
En cuanto al enfoque lox-STOP-lox, la expresión de la Cre recombinasa en un tipo de célula o tejido específico conduce a una expresión génica mutada específica del tejido, y el uso de una Cre recombinasa activada por inductor conduce a una expresión génica temporalmente mutada en presencia de un inductor como el tamoxifeno.
