a Knockin mouse olyan állatmodellt határoz meg, amelyben a kérdéses génszekvenciát transzgénnel való egy-egy szubsztitúcióval vagy olyan génszekvenciák hozzáadásával módosítják, amelyek nem találhatók meg a lokuszon belül.
a transzgén behelyezése jellemzően meghatározott lokuszokban történik. Ez a” célzott ” megközelítés kevesebb zavart okoz a transzkripció-aktív genetikai környezetben.
a Knockin egerek széles körben alkalmazhatók, a szabályozó elemek, például a promotorok vizsgálatától a terápiásán hasznos humanizált antitestek előállításáig.
Knockin mouse modell megoldásaink
a hagyományos Knockinok mellett, ahol egy érdekes génszekvenciát adunk egy endogén lokuszhoz, egy sor általánosan használt megoldást kínálunk:
- gyors kopogás (Rosa26 és Hprt)
a génexpresszió teljes ellenőrzése a legjobban tanulmányozott rosa26 és Hprt megengedő lokuszok megcélzásával.
- pontmutáció Knockin egér
egy vagy több mutált nukleotid befolyásolja egy adott fehérje működését (funkció nyeresége vagy elvesztése)
- Reporter mouse
monitorozza a genetikai eseményeket, a fehérjefunkciókat, a lokalizációt és a sejtkereskedelmet
- humanizált egérmodellek
helyettesítsen egy egér génszekvenciát az emberi megfelelővel
Géninstitúciók vagy szubsztitúciók feltételes aktiválása
minden Knockin-terv olyan feltételeket hordozhat, amelyek lehetővé teszik a gén behelyezésének vagy szubsztitúciójának aktiválását: A) bizonyos sejttípusokban egy bizonyos szövetben, míg más sejttípusok és szövetek módosítatlan, funkcionális génexpressziót mutatnak, és/vagy B) időben egy adott időpontban embrionális, szülés utáni vagy felnőtt állatokban.
jellemzően két általános megközelítést alkalmaznak:
lox-STOP-lox
a Cre rekombináz felismeri a rekombinációs loxp lokuszát, amely a STOP szekvencia törlését okozza a két LOXP hely között, lehetővé téve az érdekes mutációs gén transzkripcióját.
FLEx
mind a loxP-t, mind a lox511-et felismeri a Cre rekombináz, de a lox511-helyek csak más lox511-helyekkel rekombinálhatók, a loxP-helyekkel nem.
amikor a DNS-szekvenciát ellentétes irányú lox-helyek szegélyezik, a Cre megfordítja a szekvenciát a helyek között. Ha a DNS-szekvenciát azonos orientációjú lox-helyek szegélyezik, a Cre kivágja a szekvenciát.
az érdeklődésre számot tartó géneket körülvevő lox helyek típusának, számának és orientációjának kombinálásával hatékony FLEx eszköz hozható létre az Ön speciális tudományos igényeihez.
ami a lox-STOP-lox megközelítést illeti, a Cre rekombináz specifikus sejttípusban vagy szövetben történő expressziója szövetspecifikus mutált génexpresszióhoz vezet, az induktorral aktivált Cre rekombináz használata pedig egy induktor, például tamoxifen jelenlétében ideiglenesen mutált génexpresszióhoz vezet.
