Kinetochore-mikrotubuli forkortes ved tab af underenheder ved kinetochores af prometaphase-kromosomer

stedet for tubulin-underenheds-dissociation blev bestemt under poleret kromosombevægelse i prometaphase-mitotiske lungecellespindler ved anvendelse af fluorescensfotoblegningsteknikker og nocodasolinduceret spindelforkortelse. Synkron forkortelse af alle kinetochore-mikrotubuli blev produceret ved at inkubere celler i 17 mikrom nocodasol for at blokere mikrotubuli-samling. Under disse forhold bevægede spindelpolerne sig mod metafasepladen med en hastighed på 3.6 +/- 0.4 mikron min-1 (n = 3). På basis af anti-tubulin-immunofluorescerende farvning af celler fikseret efter inkubation i nocodasol fandt vi, at nonkinetochore-mikrotubuli hurtigt forsvandt, og kun kinetochore-fibre var til stede efter 60-90 s i nocodasol. For at lokalisere stedet for tubulin-underenheds dissociation blev et smalt stangmønster fotobleget over den ene halvspindel i prometafase-metafaseceller, der tidligere var mikroinjiceret med 5-(4,6-dichlortriasin-2-yl) amino fluorescein (DTaF) – mærket tubulin. Umiddelbart efter fotoblegning blev celler perfunderet med 17 mikrom nocodasol for at producere forkortelse af kinetochore mikrotubuli. Forkortelse blev ledsaget af et fald i afstanden mellem blegemiddelstangen og kinetochorerne. I modsætning hertil var der ringe eller intet fald i afstanden mellem blegestangen og stangen. Sammenlignet med deres oprindelige længder blev den gennemsnitlige kinetochore til polafstand forkortet med 18%, blegestangen til kinetochore-afstanden forkortet med 28% og den gennemsnitlige blegede stang til polafstand forkortet med 1,6%. Dataene giver bevis for, at tubulin-underenheder adskiller sig fra kinetochore-mikrotubuli på et sted nær kinetochore under Polens kromosombevægelse. Disse resultater er i overensstemmelse med modeller for generering af polstyrke til kromosombevægelse, hvor prometaphase-metafase polstyrke genereres i forbindelse med kinetochore.

Skriv et svar

Din e-mailadresse vil ikke blive publiceret.