mikrotubule Kinetochorowe skracają się przez utratę podjednostek na kinetochorach chromosomów prometafazy

miejsce dysocjacji podjednostek tubulinowych oznaczono podczas ruchu chromosomów poleward w mitotycznych wrzecionach prometafazowych newt płucnych komórek płucnych przy użyciu technik fluorescencyjnego fotobleachingu i indukowanego nocodazolem skracanie wrzeciona. Synchroniczne skracanie wszystkich kinetochorowych mikrotubul wytwarzano przez inkubację komórek w 17 mikrotubulach w celu zablokowania montażu mikrotubul. W tych warunkach bieguny wrzeciona przesuwały się w kierunku płytki metafazy z szybkością 3.6 +/- 0.4 mikronów min-1 (n = 3). Na podstawie immunofluorescencyjnego barwienia komórek utrwalonych po inkubacji w nocodazolu stwierdzono, że mikrotubule nonkinetochorowe szybko zniknęły, a tylko włókna kinetochorowe były obecne po 60-90 s W nocodazolu. W celu zlokalizowania miejsca dysocjacji podjednostki tubuliny, w komórkach prometafazowo-metafazowych uprzednio poddanych mikroinjekcji tubuliną znakowaną 5-(4,6-dichlorotriazyn-2-ylo) Amino fluoresceiną (dtaf) fotoblastyczny wzór pręta. Bezpośrednio po fotobleachingu komórki perfuzowano 17 mikromodazolem w celu skrócenia mikrotubul kinetochorowych. Skróceniu towarzyszyło zmniejszenie odległości między paskiem wybielacza a kinetochorami. W przeciwieństwie do tego, był niewielki lub żaden spadek odległości między paskiem wybielacza a biegunem. W porównaniu z ich początkowymi długościami średni dystans kinetochoru do bieguna został skrócony o 18%, Pasek wybielacza do kinetochoru skrócony o 28%, a średni Pasek wybielacza do bieguna skrócony o 1,6%. Dane dostarczają dowodów na to, że podjednostki tubuliny dysocjują z mikrotubul kinetochorowych w miejscu w pobliżu kinetochoru podczas ruchu chromosomu poleward. Wyniki te są zgodne z modelami generowania siły polewarda dla ruchu chromosomów, w których prometafaza-metafaza generowana jest w połączeniu z kinetochorem.

Dodaj komentarz

Twój adres e-mail nie zostanie opublikowany.