O site de tubulina subunidade dissociação foi determinado durante o poleward cromossomo movimento em prometafase newt de pulmão de células fusos mitóticos usando fluorescência photobleaching técnicas e nocodazole induzida por eixo de encurtamento. O encurtamento síncrono de todos os microtúbulos de cinetocoro foi produzido incubando células em 17 Microm nocodazol para bloquear a montagem de microtúbulos. Nessas condições, os pólos do fuso se moviam em direção à placa metafásica a uma taxa de 3.6 +/- 0.4 mícrons min-1 (n = 3). Com base na coloração imunofluorescente anti-tubulina das células fixadas após incubação no nocodazol, descobrimos que os microtúbulos nonkinetochore desapareceram rapidamente e apenas as fibras kinetochore estavam presentes após 60-90 s no nocodazol. Para localizar o site de tubulina subunidade dissociação, um estreito padrão de barra de foto-branqueadas foi através de um meio de eixo em prometafase-metafase células anteriormente microinjected com 5-(4,6-dichlorotriazin-2-il) amino fluoresceína (DTAF)-rotulado de tubulina. Imediatamente após a fotobleaching, as células foram perfundidas com 17 Microm nocodazol para produzir encurtamento de microtúbulos kinetochore. O encurtamento foi acompanhado por uma diminuição na distância entre a barra de alvejante e os kinetochores. Em contraste, houve pouca ou nenhuma diminuição na distância entre a barra de alvejante e o poste. Em comparação com seus comprimentos iniciais, a distância média de kinetochore a pólo encurtada em 18%, a barra de alvejante a distância de kinetochore encurtada em 28% e a distância média de barra branqueada a pólo encurtada em 1,6%. Os dados fornecem evidências de que as subunidades de tubulina se dissociam dos microtúbulos de kinetochore em um local próximo ao kinetochore durante o movimento do cromossomo poleward. Esses resultados são consistentes com os modelos de geração de força a favor do movimento cromossômico em que a força a favor da prometáfase-metafase é gerada em associação com o cinetocoro.
