locul disocierii subunității tubulinei a fost determinat în timpul mișcării cromozomilor poleward în fusurile mitotice ale celulelor pulmonare prometafazice folosind tehnici de albire a luminii fluorescente și scurtarea fusului indusă de nocodazol. Scurtarea sincronă a tuturor microtubulilor kinetochori a fost produsă prin incubarea celulelor în nocodazol de 17 microM pentru a bloca asamblarea microtubulilor. În aceste condiții, polii axului s-au deplasat spre placa metafazică cu o rată de 3.6 +/- 0.4 microni min-1 (n = 3). Pe baza colorării imunofluorescente anti-tubulină a celulelor fixate după incubare în nocodazol, am constatat că microtubulii nonkinetochori au dispărut rapid și numai fibrele kinetochore au fost prezente după 60-90 s în nocodazol. Pentru a localiza locul disocierii subunității tubulinei, un model îngust de bare a fost fotoblacționat pe o jumătate de fus în celulele prometafază-metafază microinjectate anterior cu tubulină marcată cu 5-(4,6-diclorotriazin-2-il) amino fluoresceină (DTAF). Imediat după fotobleaching, celulele au fost perfuzate cu 17 microm nocodazol pentru a produce scurtarea microtubulilor kinetochor. Scurtarea a fost însoțită de o scădere a distanței dintre bara de înălbire și kinetochori. În schimb, a existat o scădere mică sau deloc a distanței dintre bara de înălbire și stâlp. Comparativ cu lungimile lor inițiale, distanța medie kinetochore la pol s-a scurtat cu 18%, bara de înălbire la distanța kinetochore s-a scurtat cu 28%, iar bara medie albită la distanța polului s-a scurtat cu 1,6%. Datele oferă dovezi că subunitățile tubulinei se disociază de microtubulii kinetocor la un loc din apropierea kinetocorului în timpul mișcării cromozomului poleward. Aceste rezultate sunt în concordanță cu modelele de generare a forței poleward pentru mișcarea cromozomilor în care forța poleward prometafază-metafază este generată în asociere cu kinetocorul.
