Kinetochore mikrotubulusok rövidülnek a prometaphase kromoszómák kinetochores-I alegységeinek elvesztésével

a tubulin alegység disszociációs helyét a prometaphase Newt tüdősejt mitotikus orsóinak poleward kromoszómamozgása során fluoreszcens fotobleaching technikával és nocodazol által indukált orsórövidüléssel határoztuk meg. Az összes kinetochore mikrotubulus szinkron rövidülését 17 mikrom nocodazolban lévő sejtek inkubálásával állítottuk elő, hogy blokkoljuk a mikrotubulusok összeszerelését. Ilyen körülmények között az orsóoszlopok a metafázis lemez felé mozogtak 3.6 +/- 0.4 mikron min-1 (n = 3). A nocodazolban történő inkubálás után rögzített sejtek anti-tubulin immunfluoreszcens festése alapján megállapítottuk, hogy a nonkinetochore mikrotubulusok gyorsan eltűntek, és csak a kinetochore rostok voltak jelen 60-90 s után a nocodazolban. A tubulin alegység disszociációjának helyének lokalizálása érdekében keskeny sávmintát fényfehérítettünk az egyik félorsón prometafázis-metafázis sejtekben, amelyeket korábban 5-(4,6-diklór-triazin-2-Il) amino fluoreszceinnel (DTAF) jelölt tubulinnal injektáltunk. Közvetlenül a fotobleaching után a sejteket 17 mikrom nocodazollal perfundáltuk, hogy a kinetochore mikrotubulusok lerövidüljenek. A rövidítést a fehérítő rúd és a kinetochorok közötti távolság csökkenése kísérte. Ezzel szemben a fehérítő rúd és a rúd közötti távolság alig vagy egyáltalán nem csökkent. A kezdeti hosszúságukhoz képest az átlagos kinetochore-pólus távolság 18% – kal, a fehérítő rúd-kinetochore távolság 28% – kal, az átlagos fehérített rúd-pólus távolság pedig 1,6% – kal rövidült. Az adatok bizonyítékot szolgáltatnak arra, hogy a tubulin alegységek a kinetochore mikrotubulusoktól a kinetochore közelében lévő helyen disszociálnak a poleward kromoszóma mozgása során. Ezek az eredmények összhangban vannak a kromoszóma mozgásának poleward erő generálásának modelljeivel, amelyekben a prometafázis-metafázis poleward erő a kinetochore-val együtt keletkezik.

Vélemény, hozzászólás?

Az e-mail-címet nem tesszük közzé.