Kinetokorin Mikrotubulukset lyhenevät alayksiköiden häviämisellä prometafaasikromosomien kinetokoreissa

tubuliinin alayksiköiden dissosiaatiokohta määritettiin polewardikromosomin liikkeen aikana prometafaasi-newt-keuhkosolujen mitoottisissa spindleissä käyttäen fluoresenssivalonestotekniikkaa ja nokodatsolin aiheuttamaa karan lyhentymistä. Kaikkien kinetokorien mikrotubulusten synkroninen lyhentäminen tuotettiin inkuboimalla soluja 17 mikrometrin nokodatsolissa mikrotubulusten kokoonpanon estämiseksi. Näissä olosuhteissa karan navat liikkuivat kohti metafaasilevyä nopeudella 3.6 +/- 0.4 mikronit min-1 (n = 3). Nokodatsolin inkubaation jälkeen kiinnitettyjen solujen tubuliini-immunofluoresenssivärjäyksen perusteella todettiin, että nonkinetokorea-Mikrotubulukset hävisivät nopeasti ja vain kinetokoreakuituja oli 60-90 s nokodatsolissa. Tubuliinin alayksikön dissosiaatiopaikan paikallistamiseksi valokuvioitu kapea pylväskuvio yhden puolikaran poikki prometafaasi-metafaasisoluissa, jotka oli aiemmin mikroinjektioitu 5-(4,6-diklooritriatsin-2-yyli) amino-fluoreseiini (dtaf) – merkityllä tubuliinilla. Heti valoherkistymisen jälkeen solut perfuusioitiin 17 mikromikodatsolilla kinetokorin mikrotubulusten lyhentämiseksi. Lyhentymiseen liittyi valkaisutangon ja kinetokorien välisen etäisyyden väheneminen. Sen sijaan valkaisutangon ja tolpan välinen etäisyys väheni vain vähän tai ei lainkaan. Verrattuna niiden alkupituuksiin keskimääräinen kinetochore-napaetäisyys lyheni 18%, valkaisuainepalkki kinetochore-etäisyydelle lyheni 28% ja keskimääräinen valkaistu pylväsetäisyys lyheni 1,6%. Tulokset osoittavat, että tubuliinin alayksiköt dissosioituvat kinetokorin mikrotubuluksista kinetokorin lähellä poleward-kromosomien liikkeen aikana. Nämä tulokset ovat yhtäpitäviä kromosomin liikettä kuvaavien polewardivoimamallien kanssa, joissa prometafaasi-metafaasi-polewardivoimaa syntyy yhdessä kinetokorin kanssa.

Vastaa

Sähköpostiosoitettasi ei julkaista.