Die Stelle der Tubulin-Untereinheiten-Dissoziation wurde während der polwärts gerichteten Chromosomenbewegung in Prometaphase-Newton-Zell-mitotischen Spindeln unter Verwendung von Fluoreszenz-Photobleaching-Techniken und Nocodazol-induzierter Spindelverkürzung bestimmt. Die synchrone Verkürzung aller Kinetochore-Mikrotubuli wurde durch Inkubation von Zellen in 17 Mikromyodazol erzeugt, um die Mikrotubuli-Assemblierung zu blockieren. Unter diesen Bedingungen bewegten sich die Spindelpole mit einer Geschwindigkeit von 3.6 +/- 0.4 mikrometer min-1 (n = 3). Auf der Grundlage der Anti-Tubulin-Immunfluoreszenzfärbung von Zellen, die nach Inkubation in Nocodazol fixiert wurden, fanden wir, dass nichtkinetochore Mikrotubuli schnell verschwanden und nur kinetochore Fasern nach 60-90 s in Nocodazol vorhanden waren. Um die Stelle der Tubulin-Untereinheit-Dissoziation zu lokalisieren, wurde ein schmales Balkenmuster über eine Halbspindel in Prometaphase-Metaphase-Zellen photobleicht, die zuvor mit 5- (4,6-dichlortriazin-2-yl) amino fluorescein (DTAF) -markiertem Tubulin mikroinjiziert wurden. Unmittelbar nach dem Photobleichen wurden die Zellen mit 17 Mikromcodazol perfundiert, um eine Verkürzung der Kinetochormikrotubuli zu erzeugen. Die Verkürzung ging mit einer Verringerung des Abstands zwischen dem Bleichbalken und den Kinetochoren einher. Im Gegensatz dazu gab es wenig oder keine Abnahme des Abstands zwischen der Bleichstange und der Stange. Im Vergleich zu ihren Anfangslängen verkürzte sich die durchschnittliche Entfernung von Kinetochor zu Pol um 18%, die Entfernung von Bleichstab zu Kinetochor um 28% und die durchschnittliche Entfernung von gebleichtem Stab zu Pol um 1,6%. Die Daten liefern Hinweise darauf, dass Tubulin-Untereinheiten von Kinetochor-Mikrotubuli an einer Stelle in der Nähe des Kinetochors während der Polwärtsbewegung der Chromosomen dissoziieren. Diese Ergebnisse stimmen mit Modellen der Polewardkrafterzeugung für Chromosomenbewegungen überein, bei denen die Prometaphase-Metaphase-Polewardkraft in Verbindung mit dem Kinetochor erzeugt wird.
