El sitio de disociación de subunidades de tubulina se determinó durante el movimiento cromosómico hacia el polo en husos mitóticos de células pulmonares de tritón prometafase utilizando técnicas de fotoblanqueo por fluorescencia y huso inducido por nocodazol acortamiento. El acortamiento síncrono de todos los microtúbulos del cinetocoro se produjo incubando células en 17 microM de nocodazol para bloquear el ensamblaje de los microtúbulos. En estas condiciones, los polos del husillo se movieron hacia la placa metafásica a un ritmo de 3.6 +/- 0.4 micras min-1 (n = 3). Sobre la base de la tinción inmunofluorescente antitubulina de células fijadas después de la incubación en nocodazol, encontramos que los microtúbulos no cinetocoros desaparecieron rápidamente y solo las fibras cinetocóricas estuvieron presentes después de 60-90 s en nocodazol. Para localizar el sitio de disociación de subunidades de tubulina, se fotoblanqueó un patrón de barra estrecha a través de un medio huso en células prometafase-metafase previamente microinyectadas con tubulina etiquetada con 5(4,6-diclorotriazin-2-il) amino fluoresceína (DTAF). Inmediatamente después del fotoblanqueo, las células se perfundieron con nocodazol de 17 microM para producir acortamiento de los microtúbulos del cinetocoro. El acortamiento fue acompañado por una disminución en la distancia entre la barra de lejía y los cinetocoros. En contraste, hubo poca o ninguna disminución en la distancia entre la barra de lejía y el poste. En comparación con sus longitudes iniciales, la distancia promedio entre el cinetocoro y el poste se acortó en un 18%, la distancia entre la barra de blanqueador y el cinetocoro se acortó en un 28% y la distancia promedio entre la barra blanqueada y el poste se acortó en un 1,6%. Los datos proporcionan evidencia de que las subunidades de tubulina se disocian de los microtúbulos del cinetocoro en un sitio cercano al cinetocoro durante el movimiento cromosómico hacia los polos. Estos resultados son consistentes con modelos de generación de fuerza hacia el polo para el movimiento cromosómico en los que la fuerza hacia el polo prometafase-metafase se genera en asociación con el cinetocoro.
