Le site de dissociation de la sous-unité tubuline a été déterminé au cours du mouvement des chromosomes à l’avant du pôle dans les fuseaux mitotiques des cellules pulmonaires de la prométaphase newt à l’aide de techniques de photoblanchiment par fluorescence et de fuseau induit par le nocodazole raccourcissement. Le raccourcissement synchrone de tous les microtubules kinétochores a été produit en incubant des cellules dans 17 microm nocodazole pour bloquer l’assemblage des microtubules. Dans ces conditions, les pôles de broche se sont déplacés vers la plaque de métaphase à une vitesse de 3.6 +/- 0.4 microns min-1 (n = 3). Sur la base d’une coloration immunofluorescente anti-tubuline des cellules fixées après incubation dans le nocodazole, nous avons constaté que les microtubules non-kinétochores disparaissaient rapidement et que seules les fibres kinétochores étaient présentes après 60-90 s dans le nocodazole. Pour localiser le site de dissociation de la sous-unité de la tubuline, un motif de barres étroites a été photoblanché sur un demi-fuseau dans des cellules de la prométaphase-métaphase préalablement microinjectées avec de la tubuline marquée à la 5-(4,6-dichlorotriazin-2-yl) amino fluorescéine (DTAF). Immédiatement après le photoblanchiment, les cellules ont été perfusées avec 17 microm nocodazole pour produire un raccourcissement des microtubules kinétochores. Le raccourcissement s’est accompagné d’une diminution de la distance entre la barre d’eau de Javel et les kinétochores. En revanche, il y avait peu ou pas de diminution de la distance entre la barre d’eau de Javel et le poteau. Par rapport à leurs longueurs initiales, la distance moyenne entre le kinétochore et le pôle a été raccourcie de 18%, la distance entre la barre de blanchiment et le kinétochore de 28% et la distance moyenne entre la barre blanchie et le pôle a été raccourcie de 1,6%. Les données montrent que les sous-unités de la tubuline se dissocient des microtubules du kinétochore à un site situé près du kinétochore lors du mouvement des chromosomes vers la zone polaire. Ces résultats concordent avec les modèles de génération de force polaire pour le mouvement chromosomique dans lesquels la force polaire prométaphase-métaphase est générée en association avec le kinétochore.
