Il sito di subunità di tubulina dissociazione è stata determinata durante poleward il movimento del cromosoma in prometaphase newt delle cellule del polmone fusi mitotici mediante fluorescenza photobleaching tecniche e nocodazole indotta mandrino accorciamento. L’accorciamento sincrono di tutti i microtubuli cinetocore è stato prodotto incubando cellule in 17 MICROM nocodazolo per bloccare l’assemblaggio dei microtubuli. In queste condizioni i poli del mandrino spostato verso la piastra metafase ad una velocità di 3.6 +/- 0.4 micron min-1 (n = 3). Sulla base della colorazione immunofluorescente anti-tubulina delle cellule fissate dopo l’incubazione in nocodazolo, abbiamo scoperto che i microtubuli nonchinetocore scomparivano rapidamente e solo le fibre cinetocore erano presenti dopo 60-90 s in nocodazolo. Per localizzare il sito di dissociazione della subunità della tubulina, è stato photobleached uno schema a barre strette attraverso un mezzo fuso in cellule prometafase-metafase precedentemente microiniettate con tubulina 5-(4,6-diclorotriazin-2-il) ammino fluoresceina (DTAF). Subito dopo il photobleaching, le cellule sono state perfuse con 17 microm nocodazolo per produrre accorciamento dei microtubuli cinetocore. L’accorciamento è stato accompagnato da una diminuzione della distanza tra la barra di candeggina e i cinetocori. Al contrario, c’era poca o nessuna diminuzione della distanza tra la barra di candeggina e il palo. Rispetto alle loro lunghezze iniziali, la distanza media tra cinetocore e polo è stata accorciata del 18%, la barra di candeggina e la distanza tra cinetocore è stata accorciata del 28% e la barra media sbiancata e la distanza tra poli è stata accorciata dell ‘ 1,6%. I dati forniscono la prova che le subunità della tubulina si dissociano dai microtubuli del cinetocoro in un sito vicino al cinetocoro durante il movimento del cromosoma poleward. Questi risultati sono coerenti con i modelli di generazione di forza poleward per il movimento cromosomico in cui la forza poleward prometafase-metafase viene generata in associazione con il cinetocoro.
