de plaats van de dissociatie van de tubuline-subeenheid werd bepaald tijdens de poleward chromosoombeweging in prometafase newt lung cell mitotische spindels met behulp van fluorescentie fotobleaching technieken en nocodazol-geïnduceerde spindel verkorting. Synchrone verkorting van alle kinetochore microtubules werd geproduceerd door incuberende cellen in 17 microM nocodazole om microtubule assemblage te blokkeren. Onder deze omstandigheden bewogen de spindelpalen zich in de richting van de metafaseplaat met een snelheid van 3.6 +/- 0.4 micron min-1 (n = 3). Op basis van anti-tubuline immunofluorescent kleuring van cellen gefixeerd na incubatie in nocodazol, vonden we dat niet-kinetochore microtubuli snel verdwenen en alleen kinetochore vezels waren aanwezig na 60-90 s in nocodazol. Om de plaats van tubuline subeenheid dissociatie te lokaliseren, werd een smal staafpatroon photobleached over een halve spindel in prometaphase-metafase cellen eerder micro-projected met 5-(4,6-dichloortriazine-2-yl) amino fluoresceïne (DTAF) – geëtiketteerd tubuline. Onmiddellijk na het photobleaching, werden de cellen geperfundeerd met 17 microM nocodazole om verkorting van kinetochore microtubules te veroorzaken. Het verkorten ging gepaard met een afname van de afstand tussen de bleekstaaf en de kinetochoren. Daarentegen was er weinig of geen afname in de afstand tussen de bleekstaaf en de paal. In vergelijking met hun aanvankelijke lengte verkort de gemiddelde kinetochore afstand tot pool met 18%, de bleach bar tot kinetochore afstand verkort met 28% en de gemiddelde gebleekte bar tot pool afstand verkort met 1,6%. De gegevens verstrekken bewijsmateriaal dat de subeenheden van tubuline van kinetochore microtubules op een plaats dichtbij kinetochore tijdens poleward chromosoombeweging scheiden. Deze resultaten zijn consistent met modellen van poleward kracht generatie voor chromosoom beweging waarin prometaphase-metafase poleward kracht wordt gegenereerd in samenwerking met de kinetochoor.
