platsen för tubulin-subenhetsdissociation bestämdes under poleward-kromosomrörelse i prometaphase newt-lungcellmitotiska spindlar med användning av fluorescensfotoblekningstekniker och nocodazole-inducerad spindelförkortning. Synkron förkortning av alla kinetochore mikrotubuli framställdes genom inkubering av celler i 17 microM nocodazol att blockera mikrotubuli montering. Under dessa förhållanden rörde sig spindelpolerna mot metafasplattan med en hastighet av 3.6 +/- 0.4 mikron min – 1 (n = 3). På grundval av anti-tubulin immunofluorescerande färgning av celler fixerade efter inkubation i nocodazol fann vi att nonkinetochore-mikrotubuli snabbt försvann och endast kinetochore-fibrer var närvarande efter 60-90 s i nocodazol. För att lokalisera platsen för tubulin-subenhetsdissociation fotoblekades ett smalt stapelmönster över en halvspindel i prometafas-metafasceller som tidigare mikroinjicerats med 5-(4,6-diklortriazin-2-yl) amino fluorescein (DTAF) – märkt tubulin. Omedelbart efter fotoblekning perfuserades celler med 17 mikromnocodazol för att producera förkortning av kinetochore-mikrotubuli. Förkortning åtföljdes av en minskning av avståndet mellan blekstången och kinetochorerna. Däremot var det liten eller ingen minskning av avståndet mellan blekstången och Polen. Jämfört med deras initiala längder förkortades det genomsnittliga kinetochore-polavståndet med 18%, blekstången till kinetochore-avståndet förkortades med 28% och det genomsnittliga blekta stången till polavståndet förkortades med 1,6%. Uppgifterna ger bevis för att tubulin-subenheter dissocierar från kinetochore-mikrotubuli på en plats nära kinetochore under poleward-kromosomrörelsen. Dessa resultat överensstämmer med modeller av poleward force generation för kromosomrörelse där prometafas-metafas poleward force genereras i samband med kinetochore.
