stedet for tubulin subenhet dissosiasjon ble bestemt under poleward kromosom bevegelse i prometaphase newt lunge celle mitotiske spindler ved hjelp av fluorescens photobleaching teknikker og nocodazole-indusert spindel forkorting. Synkron forkortelse av alle kinetochore mikrotubuli ble produsert ved å inkubere celler i 17 mikrom nocodazol for å blokkere mikrotubulmontering. Under disse forholdene flyttet spindelpolene mot metafaseplaten med en hastighet på 3.6 +/- 0.4 mikron min-1 (n = 3). På grunnlag av anti-tubulin immunfluorescerende farging av celler fast etter inkubasjon i nocodazol, fant vi at nonkinetochore mikrotubuli raskt forsvant og bare kinetochore fibre var tilstede etter 60-90 s i nocodazol. For å lokalisere stedet for tubulin subenhet dissosiasjon, ble en smal bar mønster photobleached over en halv-spindel i prometaphase-metaphase celler tidligere mikroinjected med 5-(4,6-diklortriazin-2-yl) amino fluorescein (DTAF) – merket tubulin. Umiddelbart etter fotobleking ble celler perfusert med 17 mikrom nocodazol for å produsere forkortelse av kinetochore-mikrotubuli. Forkorting ble ledsaget av en reduksjon i avstanden mellom blekestangen og kinetochorene. I kontrast var det liten eller ingen reduksjon i avstanden mellom blekestangen og polen. Sammenlignet med deres opprinnelige lengder, forkortet gjennomsnittlig kinetochore til pol avstand med 18%, blekestangen til kinetochore avstand forkortet med 28% og gjennomsnittlig bleket bar til pol avstand forkortet med 1,6%. Dataene gir bevis for at tubulin subenheter dissosierer fra kinetochore mikrotubuli på et sted nær kinetochore under poleward kromosom bevegelse. Disse resultatene er i samsvar med modeller av poleward kraft generasjon for kromosom bevegelse der prometaphase-metaphase poleward kraft genereres i forbindelse med kinetochore.
